Cynnwys cuddio
1 Pecyn Cyplu Amin Strwythur-Y Biosynhwyryddion deinamig 1
2 Nodweddion Allweddol
3 Llif Gwaith Drosoddview
4 Disgrifiad o'r Cynnyrch
5 Deunyddiau Ychwanegol sydd eu hangen
6 Nodiadau Cyffredinol Pwysig
7 Cyfuniad 3 Cham o Fiomoleciwl i linyn Ligand 1
8 Gwybodaeth Ychwanegol
9 Taflen Cydweddoldeb
10 Rhifau Archebion Defnyddiol
11 Cysylltwch
12 Dogfennau / Adnoddau
12.1 Cyfeiriadau

deinamig-BIOSENSORS-logo

Pecyn Cyplu Amin Strwythur-Y Biosynhwyryddion deinamig 1

Pecyn Cyplu Amin-Strwythur-Y-BIOSYNWYRYDDION-dynamig-1-cynnyrch

Nodweddion Allweddol

  • Yn caniatáu cyplu biomoleciwlau ag aminau cynradd (e.e. terfynell NH2, lysinau) i'r llinyn ligand 1 – Coch, strwythur-Y newydd.
  • Cemeg safonol gyfleus (cemeg y GIG).
  • Yn gydnaws â heliX® Adapter Chip.
  • Yn cyd-fynd â phuro proFIRE® ar gyfer cyfuniadau ligand-DNA pur (> 5 kDa).
  • Gellir cyplu ligandau lluosog ar yr un pryd.
  • Cnwd > 95 % ligand-DNA pur ynghyd ag ansawdd y cynnyrch terfynol a bennir gan y defnyddiwr.
  • Yn cynnwys adweithyddion ar gyfer tri adwaith cyfuniad unigol (tua 10-50 o adfywiadau yr un; hyd at uchafswm o 500).
  • Yn gydnaws â phroses adfywio safonol awtomataidd.

Llif Gwaith Drosoddview

Llif Gwaith Cyfuniad 3-Cam

Pecyn Cyplu Amin Strwythur-Y Biosynhwyryddion deinamig 1

Llinell Amser: Amser ymarferol < 1 h | Deor ~ 2 h | Cyfanswm ~ 3 h

Disgrifiad o'r Cynnyrch

Rhif Archeb: HK-NYS-NHS-1
Tabl 1. Cynnwys a Gwybodaeth Storio

Deunydd Cap Swm Storio
Strwythur Y Llinyn ligand 1 GIG Glas 3 x -20°C
Clustog A [1] Tryloyw 1 x 1.8 ml -20°C
Clustog C [2] Tryloyw 3 x 1.8 ml -20°C
Byffer PE40 [3] Tryloyw 3 x 1.5 ml -20°C
ddH2O Tryloyw 1.5 mL -20°C
Trawsgysylltydd Brown 3 x -20°C
Colofn sbin puro Coch 6 x 2-8°C
Tiwbiau adwaith 2.0 ml ar gyfer colofn sbin puro   6 x RT
Uned hidlo allgyrchol (3 kDa MWCO)[4]   3 x RT
Tiwb casglu allgyrchiad   3 x RT

At ddefnydd ymchwil yn unig.
Mae gan y cynnyrch hwn oes silff gyfyngedig, gweler y dyddiad dod i ben ar y label.

PWYSIG
Gellir cludo cynhyrchion ar dymheredd gwahanol, ond dylai storio gadw at y canllawiau a amlinellir yn y Tabl.
Mae'r pecyn yn cynnwys adweithyddion sy'n ddigonol ar gyfer pum cyfuniad o tua 50-200 µg o fiomoleciwl yr un.
Mae'r slyri resin yn y golofn sbin puro yn cynnwys 0.02% sodiwm azid.

Deunyddiau Ychwanegol sydd eu hangen

Tabl 2. Deunyddiau Ychwanegol

Deunydd Sylwadau
Microcentrifuge benben Ystod cyflymder gofynnol rhwng 1,000 xg a 13,000 xg
Fortecs  
Tiwbiau adwaith 1.5 mL  
Sbectroffotomedr UV-Vis (ee Nanodrop) Ar gyfer penderfynu ar y Llinyn ligand 1 crynodiad cyfun

Mae'r holl atebion a byfferau angenrheidiol wedi'u cynnwys yn y pecyn.

Nodiadau Cyffredinol Pwysig

  • a. Efallai na fydd y llinyn Ligand lyophilized bob amser i'w gael ar waelod y tiwb; gallai aros ar wal y tiwb neu yn y cap tiwb. Gwiriwch bob amser am bresenoldeb y llinyn Ligand lyophilized, adnabyddadwy gan ei ymddangosiad pelenni clir (efallai y bydd angen i chi dynnu label y tiwb i'w weld). Os nad yw ar y gwaelod, a wnewch chi allgyrchu'r tiwb ar gyflymder uchel am ychydig funudau cyn hydoddi'r DNA mewn byffer. Fel arall, rhowch flaen eich pibed ger y belen DNA a rhowch y byffer yn uniongyrchol arno; bydd y DNA yn hydoddi'n gyflym.
  • b. Bydd y croesgysylltydd wedi'i gysylltu â'r grwpiau amin cynradd (-NH2) o'r ligand. Mae aminau cynradd yn bodoli ar N-derfyn pob cadwyn polypeptid ac yng nghadwyn ochr gweddillion asid amino lysin.
  • c. Ceisiwch osgoi defnyddio unrhyw glustogau sy'n cynnwys aminau cynradd (hy Tris, Glycine) yn ystod y broses gyfuno (Gwiriwch adran y Daflen Cydnawsedd).
  • d. Gellir defnyddio hyd at 1 mM o Dithiothreitol (DTT) yn ystod y broses gyfuno. Osgowch ddefnyddio 2-Mercaptoethanol neu unrhyw gyfryngau lleihau eraill sy'n seiliedig ar thiol yn ystod y broses gyfuno. Os oes angen asiant lleihau, argymhellir TCEP hyd at 1 mM.
  • e. Ceisiwch osgoi defnyddio protein wedi'i buro'n rhannol samples neu brotein sampllai yn cynnwys cludwyr (ee BSA).
  • dd. Er mwyn sicrhau'r cynnyrch adwaith uchaf, dylid hydoddi'r ligand yn Buffer C. Argymhellir cyfnewid byffer cyn y broses gyfuno.
  • g. Cyn dechrau, yn fyr centrifuge holl tiwbiau gyda chapiau glas, brown a thryloyw i sicrhau bod yr holl ddeunydd ar waelod y tiwbiau.
  • h. Ar gyfer moleciwlau â phwysau moleciwlaidd tua 5 kDa neu'n is, mae angen bod yn ofalus iawn yn ystod y broses buro. Efallai na fydd moleciwlau bach a rhai peptidau'n cael eu puro'n iawn gan ddefnyddio'r golofn gromatograffig a ddarperir. Am ragor o wybodaeth anfonwch e-bost at support.dbs@bruker.com.
  • ff. Os yw pI y protein yn <6, argymhellir pecyn pH isel ar gyfer cydlyniad (Gorchymyn Rhif: HK-NHS-3). Am fwy o wybodaeth, e-bostiwch support.dbs@bruker.com.

Cyfuniad 3 Cham o Fiomoleciwl i linyn Ligand 1

Darllenwch y protocol cyfan cyn cychwyn a pherfformiwch bob cam heb ymyrraeth.

AWGRYM

Gellir perfformio'r protocol hwn ar yr un pryd ar gyfer adweithiau cyplu lluosog.
Ceisiwch osgoi defnyddio protein wedi'i buro'n rhannol samples neu brotein sampllai sy'n cynnwys cludwyr (ee, BSA).
Cyn dechrau gadewch i'r croesliniwr gyrraedd tymheredd yr ystafell cyn ei ddefnyddio.
O hyn ymlaen, cyfeirir at linyn Ligand strwythur-Y 1 NHS fel llinyn Ligand 1.

Addasiad Nanolever

  1. Toddwch linyn Ligand 1 mewn 40 µL o Byffer A cyn ei ddefnyddio, troellwch nes bod yr holl solidau wedi toddi'n llwyr a throellwch i lawr am gyfnod byr.
  2. Toddwch y croesgysylltydd (cap brown) drwy ychwanegu 100 µL o ddH2O, trowch ef nes bod yr holl solidau wedi toddi'n llwyr a throellwch i lawr am gyfnod byr. PWYSIG: Defnyddiwch gyfansoddyn ffres bob amser.
  3. Ychwanegwch 10 µL o'r toddiant cysylltu newydd ei baratoi at un aliquot llinyn Ligand 1. Taflwch y toddiant cysylltu sy'n weddill o gam 2.
  4. Vortecs yr adweithyddion am 10 eiliad, troelli i lawr a deor am 20 munud ar dymheredd ystafell.
    PWYSIG Peidiwch â mynd y tu hwnt i'r amser magu neu bydd cynnyrch yr adwaith yn lleihau.
  5. Yn y cyfamser, ecwilibrwch ddwy golofn sbin puro (cap coch) ar gyfer un adwaith cyplu:
    • a. Tynnwch sêl waelod y golofn a llacio'r cap (peidiwch â thynnu'r cap).
    • b. Rhowch y golofn mewn tiwb adwaith 2.0 ml.
    • c. Allgyrchwch ar 1,500 xg am 1 funud i gael gwared ar y toddiant storio.
    • d. Ychwanegwch 400 µL o Gluffer C at wely resin y golofn. Allgyrchwch ar 1,500 xg am 1 funud i gael gwared â'r byffer.
    • e. Ailadroddwch gam d a thaflwch y byffer canlyniadol o'r tiwb adwaith. Dylai'r golofn sbin puro fod mewn cyflwr sych nawr.
  6. Sampllwytho
    • a. Rhowch y colofnau o gam 5 mewn tiwbiau adwaith 1.5 mL newydd.
    • b. Tynnwch gap colofn sbin rhif 1 a chymhwyso'r sample o gam 4 i ben y gwely resin.
    • c. Allgyrchwch ar 1,500 xg am 2 funud i gasglu'r sample (llif-drwodd). Taflwch y golofn troelli Puro ar ôl ei defnyddio.
    • d. Tynnwch gap colofn sbin rhif 2 a chymhwyso'r sample o gam c i'r gwely resin.
    • e. Allgyrchwch ar 1,500 xg am 2 funud i gasglu'r sample (llif-drwodd). Taflwch y golofn troelli Puro ar ôl ei defnyddio.

Conjugation Ligand

  1. Ychwanegu tua. 100 µg (hyd at uchafswm o 200 µg) o’r ligand (crynodiad tua 0.5 – 50 mg/mL) i’r sample o gam 6. Ar gyfer yr amodau gorau posibl, defnyddiwch gyfaint o tua. 50 µL.
    EXAMPLE: Addaswch y crynodiad protein i 2 mg/mL a defnyddiwch 50 µL ar gyfer cyfuniad.
    PWYSIG Sicrhewch nad yw byffer storio'r ligand yn cynnwys unrhyw aminau cynradd, ee byfferau Tris, glycin (gwiriwch y Nodiadau Pwysig).
  2. Cymysgwch yr adwaith trwy bibellu i fyny ac i lawr a gadewch iddo ymateb ar dymheredd ystafell am o leiaf 1 awr.
    PWYSIG Peidiwch â fortecs. Os oes angen, gellir cynnal yr adwaith ar 4 °C gydag amser adweithio hirach (ee dros nos).

proFIRE® Puro

  1. Perfformiwch puriad gan ddefnyddio'r llif gwaith proFIRE® priodol (cyfeiriwch at y Llawlyfr Defnyddiwr proFIRE®). Gwnewch yn siŵr bod y sampcyfaint le yw 160 µL.
    1. a. Os yw'r cyfaint yn llai na 160 µL, llenwch y cyfaint coll gyda Byffer A.
      b. Os yw'r cyfaint yn fwy na 160 µL, gwnewch rediadau 160 µL ychwanegol tan yr holl sample yn cael ei fwyta.
    2. Defnyddiwch y Data Viewmeddalwedd y proFIRE® i nodi pa ffracsiynau sy'n cynnwys cyfuniad pur.
      Mae cynampDangosir y cromatogram yn yr adran Gwybodaeth Ychwanegol: puro proFIRE® o gyfuniad llinyn Ligand 1.
    3. Tynnwch y ffracsiynau a argymhellir o'r casglwr ffracsiynau.

AWGRYM

Peidiwch â chadw cyfuniad llinyn Ligand 1 am gyfnod hir yn y byffer rhedeg proFIRE®. Ewch ymlaen ar unwaith â'r cyfnewid byffer.

Cyfnewidfa Byffer

  1. Ychwanegwch 500 µL o'r ffracsiwn proFIRE® cyntaf sy'n cynnwys y cyfuniad llinyn Ligand 1 i'r uned hidlo allgyrchol. Allgyrchwch ar 13,000 xg (hyd at 14,000 xg) am 10 munud a thaflwch y llif drwodd.
  2. Ychwanegwch weddill y ffracsiynau i'r un uned hidlo ac ailadroddwch y cam allgyrchu er mwyn casglu'r holl samples mewn un tiwb. (Gwiriwch Gwybodaeth ychwanegol: Cyfnewid Clustog a Crynodiad gydag Unedau Hidlo Allgyrchol).
  3. Ychwanegwch 350 µL o glustog PE40 (neu TE40, HE40) a'i allgyrchu ar 13,000 xg am 10 munud. Taflwch y llif drwodd.
    PWYSIG Os nad yw'r protein yn sefydlog yn PE40 (neu TE40, HE40), gwiriwch gydnawsedd byffer gyda'r daflen cydweddoldeb switchSENSE®.
  4. Ychwanegwch 350 µL o glustog PE40 (neu TE40, HE40) a'i allgyrchu ar 13,000 xg am 15 munud. Taflwch y llif drwodd.
  5. I adfer y cyfuniad llinyn Ligand 1, rhowch yr uned hidlo allgyrchol wyneb i waered mewn tiwb casglu allgyrchol newydd (a ddarperir yn y pecyn).
    Troellwch ar 1,000 xg am 2 funud i drosglwyddo'r sample i'r tiwb.

Aliquots a Storio

  1. Mesurwch amsugnedd cyfuniad llinyn Ligand 1 ar 260 nm Pecyn Cyplu Amin-Strwythur-Y-BIOSYNWYRYDDION-dynamig-1-ffig-2 ar Sbectrophotometer UV-Vis (ee Nanodrop).
  2. Pennwch grynodiad cyfuniad llinyn Ligand 1 (c1) drwy fewnosod Pecyn Cyplu Amin-Strwythur-Y-BIOSYNWYRYDDION-dynamig-1-ffig-2i'r hafaliad canlynol:Pecyn Cyplu Amin-Strwythur-Y-BIOSYNWYRYDDION-dynamig-1-ffig-3lle mae d yn hyd y llwybr (fel arfer yn hafal i 1 cm; fodd bynnag, gwiriwch lawlyfr defnyddiwr y Spectrophotomedr UV-Vis) a  Pecyn Cyplu Amin-Strwythur-Y-BIOSYNWYRYDDION-dynamig-1-ffig-7yw cyfernod difodiant y DNA ar 260 nm, sy'n hafal i 272,000.
  3. I gael hydoddiant parod i'w ddefnyddio ar gyfer gweithrediad biosglodion, addaswch y crynodiad i 500 nM (neu hyd at 1 µM) gyda byffer PE40 (neu TE40, HE40) (gan gynnwys hyd at 10% glyserol, os oes angen) a pharatowch 20 µL aliquots.
  4. Storio rhwng -86 ° C ac 8 ° C, fel y dymunir.
    Mae sefydlogrwydd yr hydoddiant yn gysylltiedig â sefydlogrwydd y moleciwl ligand.
    PWYSIG Cyn mesur rhyngweithio switchSENSE®, ychwanegwch y llinyn addasydd priodol i'r datrysiad cyfun.

Gwybodaeth Ychwanegol

puro proFIRE® o gyfuniad llinyn Ligand 1

  1. Er mwyn sicrhau'r canlyniadau gorau o fesuriad, ni ddylai unrhyw llinyn Ligand 1 am ddim fod yn bresennol ar y sglodyn. Felly, rhaid puro cyfuniadau llinyn 1 Ligand crai trwy gromatograffaeth cyfnewid ïon cyn eu mesur. Mae'r cam rheoli ansawdd hwn yn rhoi gwybodaeth ddefnyddiol ychwanegol i chi am eich sample purdeb.
  2. Rydym yn argymell defnyddio'r system proFIRE® sydd â cholofn cyfnewid ïonau, Byffer A [1] a Byffer B [5], sydd â'r un cyfansoddiad, ond crynodiad halen gwahanol, gan ganiatáu gwahanu'r brig.
    PWYSIG Ar gyfer llinyn 1 Ligand strwythur-Y – pecyn NHS, nodwch 24 fel hyd y DNA (Math 1) wrth gychwyn y rhaglen buro.
    Yn Ffigur 1, darlunnir cromatogram proFIRE® nodweddiadol o buro cyfuniad llinyn Ligand 1, lle mae brig y cyfuniad protein-DNA wedi'i wahanu oddi wrth y protein rhydd (chwith) a'r DNA rhydd (dde).
    PWYSIGMae gan system proFIRE® feddalwedd wedi'i theilwra ar gyfer adnabod a meintioli cyfuniadau DNA yn awtomatig.
  3. Ar ôl puro, casglwch ffracsiynau cyfun llinyn 1 Ligand (Ffigur 1: ffracsiynau 8-10), canolbwyntio'r cyfun, a chyfnewid byffer â'ch byffer o ddewis gan ddefnyddio uned hidlo Allgyrchol, fel y disgrifir yn adran II.Pecyn Cyplu Amin-Strwythur-Y-BIOSYNWYRYDDION-dynamig-1-ffig-4Ffigur 1. Cromatogram proFIRE® o buro cyfuniad llinyn ligand. Byfferau a ddefnyddiwyd: Byffer A [1]; Byffer B [5].
    Colofn: colofn proFIRE®. Llif: 1 mL/mun. Rhaglen a ddefnyddiwyd: hyd DNA 24, Math 1.

Cyfnewid Clustog a Crynodiad gydag Unedau Hidlo Allgyrchol

  1. Cymerwch un uned hidlo allgyrchol, ychwanegwch y gyfaint priodol (500 µL) o glustog yn y ddyfais hidlo, a'i chaeio.
  2. Rhowch ddyfais hidlo wedi'i chapio yn y rotor centrifuge, gan alinio'r strap cap tuag at ganol y rotor; gwrthbwyso gyda dyfais debyg.
  3. Troellwch y ddyfais ar 13,000 xg (neu 14,000 xg) am yr amser penodol.
  4. Tynnwch y llif drwodd ac ailadroddwch gamau 1-3 gyda chyfaint o 350 µL.
  5. Tynnwch y ddyfais ymgynnull o'r centrifuge a gwahanwch y ddyfais hidlo o'r tiwb microcentrifuge.
  6. I adennill y conjugate, gosod y ddyfais hidlo wyneb i waered mewn tiwb allgyrchol glân, alinio cap agored tuag at ganol y rotor; gwrthbwyso gyda dyfais debyg. Troellwch am 2 funud ar 1,000 xg i drosglwyddo'r sample o'r ddyfais i'r tiwb.Pecyn Cyplu Amin-Strwythur-Y-BIOSYNWYRYDDION-dynamig-1-ffig-5

Taflen Cydweddoldeb

ychwanegion byffer
Gellir cydgysylltu ligandau â'r holl becynnau cyplu sydd ar gael gyda llawer o wahanol ychwanegion. Mae'r rhestr ganlynol yn dangos yr holl rai sydd wedi'u profi, ond nodwch y gallai eraill nad ydynt wedi'u rhestru yma gael eu defnyddio'n llwyddiannus hefyd.

Pecyn Cyplu Amin-Strwythur-Y-BIOSYNWYRYDDION-dynamig-1-ffig-6

* asiantau lleihau sy'n seiliedig ar thiol
** yn cynnwys aminau cynradd
*** rhybudd, gall niweidio'r ligand

pH/pI

Gall gwerth pH y byffer cydlyniad amrywio o pH 5.0 i pH 8.0, yn dibynnu ar nodweddion y ligand. Wrth berfformio cyfuniad o broteinau â pI o <6, sylwch y gallai defnyddio byffer â pH is arwain at well cnwd o gyfuniad.

byffer pH Gorchymyn Rhif Cyfansoddiad
Clustog Ffosffad-Citrad pH 5 – Halen byffer 50 mM, 150 mM NaCl
Clustog M pH 6.5 BU-M-150-1 50 mM MES, 150 mM NaCl
Clustog A pH 7.2 BU-P-150-10 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl
Clustog C pH 8.0 BU-C-150-1 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl

Crynodiad halen
Ar gyfer cyfuniadau safonol, defnyddir halen byffer 50 mM a 150 mM NaCl (halen monofalent).
Wrth wneud cyfuniad o ligandau â gwefr gref, gwnewch yn siŵr bod crynodiad NaCl yn ddigon uchel (argymhellir NaCl hyd at 400 mM). Fel arall, gall dyodiad DNA ddigwydd.
Mae effaith amddiffynnol cationau sodiwm monovalent yn arwain at sefydlogi DNA trwy niwtraleiddio'r gwefr negatif ar asgwrn cefn ffosffad siwgr.

Rhifau Archebion Defnyddiol

Tabl 3. Rhifau Archebion

Enw Cynnyrch Swm Gorchymyn Rhif
Pecyn cyplu Amine strwythur-Y 2 – Gwyrdd 3 chyfuniad HK-NYS-GIG-2
Uned hidlo allgyrchol (10 kDa MWCO) 5 pcs. CF-010-5
Clustog 10x A [1] 50 mL (cynnyrch 500 mL) BU-P-150-10
Clustog B 5x [5] 50 mL (cynnyrch 250 mL) BU-P-1000-5
1x Byffer C [2] 12 mL BU-C-150-1

Cysylltwch

Biosynhwyryddion Dynamig GmbH
Perchtinger Str. 8/10 81379 Munich yr Almaen

Bruker Gwyddonol LLC
40 Ffordd Manning, Manning Park Billerica, MA 01821 UDA

Gwybodaeth Archeb archebu.biosensors@bruker.com
Cymorth Technegol support.dbs@bruker.com

www.dynamic-biosensors.com
Mae offerynnau a sglodion wedi'u peiriannu a'u cynhyrchu yn yr Almaen. ©2025 Dynamic Biosensors GmbH
At Ddefnydd Ymchwil yn Unig. Ddim i'w ddefnyddio mewn gweithdrefnau diagnostig clinigol.

  1. Clustog A: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 7.2
  2. Clustog C: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 8.0
  3. Clustogi PE40: 10 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 40 mM NaCl, pH 7.4, 0.05 % Tween, 50 µM EDTA, 50 µM EGTA
  4. Ar gyfer cyfuniad o broteinau â phwysau moleciwlaidd uwch na 20 kDa: Gellir archebu unedau hidlo allgyrchol gyda MWCO o 10 kDa ar gyfer proses grynhoi gyflymach (Gorchymyn Rhif: CF-010-5).
  5. Clustogi B: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 1M NaCl, pH 7.2

www.dynamic-biosensors.com

Dogfennau / Adnoddau

Pecyn Cyplu Amin Strwythur-Y Biosynhwyryddion deinamig 1 [pdfLlawlyfr Defnyddiwr
HK-NYS-NHS-1, Pecyn Cyplu Amin Strwythur-Y 1, Pecyn Cyplu Amin 1, Pecyn Cyplu 1, Pecyn 1

Cyfeiriadau

Gadael sylw

Ni fydd eich cyfeiriad e-bost yn cael ei gyhoeddi. Mae meysydd gofynnol wedi'u marcio *