BIOSENSORS deinamig helX ynghyd â Phecyn Asiant Lleihau 1

Nodweddion Allweddol

• Caniatáu ar gyfer lleihau bondiau disulfide gan ddefnyddio TCEP.
• Yn gydnaws â phroteinau a gwrthgyrff (MW > 20 kDa).
• Lleihad gwrthgyrff safle-benodol.
• Mae'n bosibl cyplu moleciwlau llai ar unwaith (cyfeiriwch at y llawlyfr defnyddiwr HK-MAL).
• Gellir lleihau ligandau lluosog ar yr un pryd.
• Yn cynnwys adweithyddion ar gyfer dau adwaith lleihau unigol.

Disgrifiad o'r Cynnyrch

Rhif Archeb: RK-PA-1

Tabl 1. Cynnwys a Gwybodaeth Storio

Deunydd	Cap	Swm	Storio
TCEP (500 mM)	Coch	2 x 20 µL	-20°C
Lleihau Byffer [1]	Gwyn	2 x 1.8 ml	-20°C
Colofn sbin puro	Coch	4 x	2-8°C
Tiwbiau adwaith 2.0 ml ar gyfer colofn sbin puro		4 x	RT
Uned hidlo allgyrchol (10 kDa MWCO)		2 x	RT
Tiwb casglu allgyrchiad		4 x	RT

At ddefnydd ymchwil yn unig.

Mae gan y cynnyrch hwn oes silff gyfyngedig, gweler y dyddiad dod i ben ar y label.

PWYSIG

Gellir cludo cynhyrchion ar wahanol dymereddau, ond dylai storio gadw at y canllawiau a amlinellir yn y Tabl. Mae'r slyri resin yn y golofn sbin puro yn cynnwys 0.02% sodiwm azid.

Deunyddiau Ychwanegol sydd eu hangen

Tabl 2. Deunyddiau Ychwanegol

Deunydd	Sylwadau
Microcentrifuge benben	Ystod cyflymder gofynnol rhwng 1,000 xg a 13,000 xg
Fortecs
Tiwbiau adwaith 1.5 mL

Mae'r holl atebion a byfferau angenrheidiol wedi'u cynnwys yn y pecyn.

3-Cam Lleihau Biomolecule mewn Tiwb Adwaith

Darllenwch y protocol cyfan cyn dechrau a perfformio pob cam heb ymyrraeth.

AWGRYM

Gellir perfformio'r protocol hwn ar yr un pryd ar gyfer adweithiau cyplu lluosog

Cyfnewid Clustog Protein/Gwrthgorff

1. Gwlychu'r bilen uned hidlo allgyrchol gyda 100 µL Lleihau Byffer.
2. Ychwanegu tua. 200 µg (hyd at 500 µg) o brotein/gwrthgorff i'r uned hidlo o gam 1. Os oes angen ychwanegwch y Byffer Lleihau i'r hidlydd nes cyrraedd uchafswm cyfaint o 450 µL a centrifuge ar 13,000 xg (hyd at 14,000 xg) am 5 min a thaflu llif-drwodd.
3. Ychwanegu 350 µL o Byffer Lleihau a centrifuge ar 13,000 xg am 5 munud a thaflu llif trwodd eto.
4. Ailadroddwch gam 3, unwaith eto gydag amser centrifugation terfynol o 10 munud i gael cyfaint terfynol o tua. 80 µL.
5. Casglwch sampnaill ai gyda phibed 100 µL i mewn i diwb newydd neu drwy osod y ddyfais hidlo wyneb i waered mewn tiwb allgyrchol newydd, allgyrchydd am 2 funud ar 1000 x g.

Lleihau gyda TCEP

1. Paratoi datrysiad TCEP 2.5 mM yn Lleihau Byffer trwy ychwanegu 1 µL o 500 mM TCEP i mewn i 199 µL Lleihau Byffer.
   Paratowch bob amser yn uniongyrchol cyn ei ddefnyddio.
2. Ychwanegu Byffer Lleihau i'r sampLe vial am gyfanswm cyfaint o 98 µL ac ychwanegu 2 µL o hydoddiant TCEP 2.5 mM i gael crynodiad terfynol o 50 µM TCEP. Cymysgwch yr adwaith trwy bibellu i fyny ac i lawr.
3. Deorwch yr hydoddiant ar 37 ° C ar 400 rpm am 2 awr i sicrhau gostyngiad llwyr.

Puro a Chanolbwyntio

1. Cydraddoli dwy golofn sbin puro (cap coch) ar gyfer un olchfa TCEP:
   a. Tynnwch sêl waelod y golofn a llacio'r cap (peidiwch â thynnu'r cap).
   b. Rhowch y golofn mewn tiwb adwaith 2.0 ml.
   c. Centrifuge ar 1,500 × g am 1 munud i gael gwared ar yr ateb storio.
   d. Ychwanegu 400 µL o Byffer Lleihau i wely resin y golofn. Centrifuge ar 1,500 × g am 1 munud i gael gwared â byffer.
   e. Ailadroddwch gam d a thaflwch y byffer canlyniadol o'r tiwb adwaith. Dylai'r golofn sbin puro fod mewn cyflwr sych nawr.

TCEP golchi

a. Rhowch y colofnau o'r cam blaenorol mewn tiwbiau adwaith 1.5 mL newydd.
b. Tynnwch gap colofn sbin rhif 1 ac arllwyswch yr s yn ofalusample i ben y gwely resin.
c. Centrifuge ar 1,500 xg am 2 funud i gasglu'r sample (llif-drwodd). Taflwch y golofn sbin puro ar ôl ei defnyddio.
d. Tynnwch gap colofn sbin rhif 2 ac arllwyswch yr sample o'r cam blaenorol i'r gwely resin.
e. Centrifuge ar 1,500 xg am 2 funud i gasglu'r sample (llif-drwodd). Taflwch y golofn sbin puro ar ôl ei defnyddio.
f. Cyplu Thiol yn ôl llawlyfr defnyddiwr (HK-MAL-1 neu HK-MAL-2) o s gostyngedigampgellir perfformio le.

Gwybodaeth Ychwanegol

Cyfnewid Clustog a Crynodiad gydag Unedau Hidlo Allgyrchol 

1. Cymerwch un uned hidlo allgyrchol, ychwanegwch y cyfaint priodol o glustogi yn y ddyfais hidlo, a'i gapio.
2. Rhowch ddyfais hidlo wedi'i chapio yn y rotor centrifuge, gan alinio'r strap cap tuag at ganol y rotor; gwrthbwyso gyda dyfais debyg.
3. Troellwch y ddyfais ar 13,000 xg (neu 14,000 xg) am yr amser penodol.
4. Tynnwch y llif drwodd ac ailadroddwch gamau 1-3.
5. Tynnwch y ddyfais ymgynnull o'r centrifuge a gwahanwch y ddyfais hidlo o'r tiwb microcentrifuge.
6. I adennill y conjugate, gosod y ddyfais hidlo wyneb i waered mewn tiwb allgyrchol glân, alinio cap agored tuag at ganol y rotor; gwrthbwyso gyda dyfais debyg. Troellwch am 2 funud ar 1,000 xg i drosglwyddo'r sample o'r ddyfais i'r tiwb.
   

Rhifau Archebion Defnyddiol

Tabl 3. Rhifau Archeb

Enw Cynnyrch	Swm	Gorchymyn Rhif
helX ® Pecyn cyplu Thiol 1	5 x	HK-MAL-1
helX ® Pecyn cyplu Thiol 2	5 x	HK-MAL-2
Uned hidlo allgyrchol (3 kDa MWCO)	5 pcs.	CF-003-5
Uned hidlo allgyrchol (10 kDa MWCO)	5 pcs.	CF-010-5
Clustog 10x A [2]	50 mL (cynnyrch 500 mL)	BU-P-150-10
Clustog 5x B [3]	50 mL (cynnyrch 250 mL)	BU-P-1000-5

Cysylltwch

Biosynhwyryddion Dynamig GmbH	Biosynhwyryddion Dynamig, Inc
Perchtinger Str. 8/10	Canolfan Fasnach 300, Swît 1400
81379 München	Woburn, MA 01801
Almaen	UDA

Gwybodaeth Archeb order@dynamic-biosensors.com
Cymorth Technegol support@dynamic-biosensors.com

1. Lleihau Byffer: 100 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, EDTA 5 mM, pH 7.4
2. Clustog A: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 7.2
3. Clustog B: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 1 M NaCl, pH 7.2

CEFNOGAETH CWSMERIAID

www.dynamic-biosensors.com
Mae offerynnau a sglodion yn cael eu peiriannu a'u cynhyrchu yn yr Almaen.
©2024 Biosynhwyryddion Dynamig GmbH | Biosynhwyryddion Dynamic, Inc Cedwir pob hawl.

Dogfennau / Adnoddau

BIOSENSORS deinamig helX ynghyd â Phecyn Asiant Lleihau 1 [pdfLlawlyfr Defnyddiwr RK-PA-1, heliX plws Pecyn Asiant Lleihau 1, heliX plws, Pecyn Asiant Lleihau 1, Pecyn Asiant 1, Cit 1

Cyfeiriadau

• Llawlyfr Defnyddiwr